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pLB 零背景快速連接試劑盒(VT205)

廠家:天根生化科技(北京)有限公司
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VT205-01 20次 780元

產品簡介

pLB零背景快速克隆試劑盒是一種陽性選擇克隆系統,可以高效克隆各種PCR產物和任何具有平末端或粘性末端的DNA片段。該試劑盒對磷酸化或非磷酸化的DNA片段都有效。陽性選擇載體和插入片段連接僅需5 min即可獲得超過95%的陽性重組克隆。由具有校正活性的聚合酶(如:Pfu Polymerase)擴增的平末端PCR產物可直接連入克隆載體。由無校正活性的聚合酶(如:Taq Polymerase)或聚合酶混合物擴增的PCR產物在連接前需用試劑盒提供的熱穩定DNA平端化酶進行末端平端化(7 min)即可。連接產物可直接轉化常用的大腸桿菌菌株。

試劑盒提供一個新穎的即用型陽性選擇克隆載體pLB Vector。該載體含有致死基因(內含多克隆位點),多克隆位點插入外源片段會引起基因失活,因此只有轉化了重組質粒的細菌才能存活形成克隆菌落。而自身環化的pLB Vector表達致死的毒性蛋白(無外源片段插入),轉化后殺死大腸桿菌細胞。這種陽性篩選策略無需藍白斑篩選,極大地加速了克隆篩選進程。

 

產品特點

高效快速:零背景無需藍白斑篩選,5 min快速連接

靈敏廣泛:適合低濃度片段和長片段連接,適合平/粘末端連接

 

不同片段使用量

1.載體與片段的摩爾比控制在1:3-1:10,對于1kb以下的片段建議使用1:3的比例,1kb以上的片段建議使用1:7的比例。

2.請根據凝膠電泳或紫外分光光度計檢測后的濃度和片段長度來計算其摩爾比。插入片段用量,可根據以下公式粗略計算:

連接體系中35ng的載體,不同大小的PCR產物最佳加入量舉例如下:

PCR產物長度(bp

最佳的使用量(ng

700 bp

25 ng

2000 bp

165 ng

 

pLB Vector圖譜

 

反應體系

標準體系為10 μl體積,5 μl的反應體系也能取得很好的效果,試劑用量減半。

 

保存條件

請將試劑盒置于-20保存,避免反復凍融。

地址:北京市海淀區西小口路66號東升科技園(北領地)C7-3 電話:800-990-6057
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