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無細胞蛋白表達系統

發布日期:2012年07月24日   瀏覽次數34198

 

 無細胞蛋白表達系統,含有蛋白合成所需各主要組分(氨基酸、酶、各種因子等),不受細胞核(核酸DNA/RNA)、線粒體、細胞骨架等的干擾,能夠在體外快速、大量表達蛋白。體外無細胞蛋白表達系統分為原核和真核兩大類,原核系統以細菌裂解物為基礎,如大腸桿菌系統;真核系統以真核細胞裂解物為基礎,包括麥胚系統、昆蟲系統、兔網織紅細胞系統等。這一真正的“開放”系統,能夠特異性表達目的蛋白,產生的蛋白可用于蛋白質功能檢測、結構分析等下游實驗。該系統應用至今,已成功表達超過2 萬種蛋白,其中包括13364 個人類的基因。部分數據列表如下:



無細胞蛋白表達系統特點

■ 操作簡便:只需按照說明書添加各種成分即可,像做PCR 一樣簡單

■ 需時短:只需2-24 小時即可完成實驗

■ 表達量高:可實現規模表達,最大表達量可達50 mg/10 ml 反應體系

■ 輕松表達困難蛋白:突破傳統細胞內表達的極限,實現毒蛋白、膜蛋白、包涵體及不溶蛋白的表達

■ 蛋白共表達:可以進行多個模板的同時表達

■ 開放系統:能夠添加蛋白酶抑制劑、稀有密碼子,進行氨基酸標記等


無細胞蛋白表達系列技術簡介

CFS無細胞蛋白表達系列為真核體外無細胞蛋白表達系統,使用獨特的技術去除了翻譯抑制物的麥胚提取物(WEPRO ),能夠大量表達可溶性的全長蛋白。該系列產品采用非偶聯的轉錄和翻譯系統,目的蛋白得率與RTS 系列產品相當。

1)CFS 無細胞蛋白表達原理

* 非偶聯的轉錄和翻譯系統

CFS 系列產品中包括模板構建、轉錄和翻譯反應所需全部試劑。首先構建攜帶SP6 啟動子、E01 增強子、目的基因的線性模板或質粒,隨后在轉錄反應液中進行體外轉錄,再以獲得的mRNA 為模板進行翻譯反應。翻譯反應有三種方法可供選擇,分別為Bilayer Reaction Method、Repeated Batch Method、Filter-and-Feed Method,這些方法都可以和儀器配合使用,其中Bilayer Reaction Method 手工操作非常簡便,因此被廣泛使用。


* 多種翻譯系統

對于WEPRO 而言,前期的模板準備和轉錄mRNA 相同,不同的是翻譯系統,可以采用以下三種方法進行翻譯。Bilayer Reaction Method 利用反應液和麥胚裂解物之間的密度差相互滲透,在液面相交處進行反應,隨著時間的推進,溶液逐漸由兩相變為單一混合物而終止。用移液器混勻后,即得到包含目的蛋白的溶液。該方法可以與自動化儀器(Protemist DT II, GenDecoder )配合使用。也可以手工操作(請參見說明書)。Repeated Batch Method 通過離心的方式不斷的使反應液通過麥胚裂解物,從而不斷的合成目的蛋白,該方法既可以手工操作(需要離心機),也可以配合儀器使用。Filter-and-Feed Method 利用 Protemist XE 儀器,不斷供給mRNA 和翻譯反應液,并過濾掉翻譯反應的副產物,從而大規模生成目的蛋白。













 

Premium

PLUS
Expression

Kit

WEPRO1240

系列

WEPRO7240

系列

1240

1240H

1240G

7240

7240h

7240g

最大得率/反應

40 μg

20 μg

100 μg

500 μg

40 μg

200 μg

1 mg

標準反應體系

226 μl

226 μl

1.2 ml

6 ml

226 μl

1.2 ml

6 ml

模板類型

線性/ 質粒

質粒

質粒

質粒

質粒

質粒

質粒

反應時間

16h

16h

16h

16h

16h

16h

16h

反應溫度

15

 /26

15

/26

15

 /26

15

/26

15

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15

/26

15

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http://www.cfsciences.com/eg/index.html


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